北京時間7月27日2時，2009年世界游泳錦標賽結束了游泳項目首日的較量，在羅馬當地時間傍晚進行的首日第二段賽事中，一共決出了4項冠軍，美國、荷蘭、意大利和德國各獲得一項冠軍，菲爾普斯在男子4乘100米自由泳接力賽中摘取第一金，我國選手張琳獲得男子400米自由泳第三名，中國女隊則獲得4乘100米自由泳接力第六名。另外焦劉洋進入到女子100米蝶決賽。周雅菲則在附加賽中遺憾輸給對手。

　　為了讓整個賽場充滿著戰場的氣氛，選手出場時大會采用的是漢斯-季默在電影《角斗士》裡制作的音樂《The Battle》。男子4乘100米自由泳接力決賽，美國隊以3分09秒21獲得冠軍，並打破了賽會紀錄。美國隊屏棄上午預賽的二線陣容，由菲爾普斯、羅切特、格雷維斯和阿德裡安組成最強組合，但菲爾普斯的第一棒游出了48秒78，僅僅列在第三位，落後巴西和法國。第二棒的羅切特也沒有扭轉頹勢，格雷維斯表現不錯，頭50米就追到了第二，但後50米局勢大亂，俄羅斯第三棒伊季托夫大發神威，幫助本隊衝到了第一，美國隊還是第二！

　　第四棒的爭奪開始了！美國四棒阿德裡安表現冷靜自若，他在後50米的充分發力，幫助美國隊輕松超越俄羅斯隊，最終美國隊以3分09秒21拿到了冠軍！菲爾普斯看上去如釋重負。

　　荷蘭隊獲得了女子4乘100米自由泳接力決賽冠軍，成績是3分31秒72，打破了她們自己保持的世界紀錄，德國隊一路猛追，最後僅以0秒11的劣勢位居亞軍，澳大利亞隊獲得第三，美國隊獲得第四。我國派出了李哲思、朱倩蔚、唐奕和龐佳穎四名選手，李哲思第一棒發揮正常，排在第六，第三棒的唐奕曾一度排在第5，最終中國隊以3分35秒63獲得第六。

　　世界紀錄保持者、本土選手佩萊格裡尼在女子400米自由泳決賽中，以3分59秒15獲得冠軍，並打破她自己保持的世界紀錄。佩萊格裡尼在北京奧運會上僅僅獲得第5名，這次在本土作戰，佩萊格裡尼斗志旺盛，從50米開始就一路保持領先到終點。英國雙姝這次未能實現奧運奇跡，傑克遜以4分0秒60獲得亞軍，奧運冠軍阿德林頓以4分0秒79獲得第三。

　　此外還進行了四個項目的半決賽。首先結束的是女子100蝶的半決賽，結果上午創造賽會紀錄的瑞典選手斯約特羅姆以56秒44的成績打破了德布魯因保持的世界紀錄，焦劉洋在第一小組游的不錯，她以57秒25獲得小組第二，這個成績也逼近了她個人最好紀錄，最後排名第5，順利進入決賽。 而周雅菲的成績為57秒56，她和荷蘭人維爾德胡伊斯成績相同，兩人都位列第7，兩人只能進行附加賽，雖然周雅菲全力拼搏，游出了57秒62，但維爾德胡伊斯游出了57秒38，周遺憾告別決賽。

　　女子200米個人混合泳半決賽，美國人庫科爾斯以2分07秒03排第一，並打破了澳大利亞選手萊斯保持的世界紀錄。我國選手劉京以2分11秒05排在了第10位，李佳星以2分12秒75排在第14位，兩人都無緣決賽。

　　在男子50米蝶泳半決賽中，西班牙選手穆諾茲以22秒68再破他上午創造的賽會紀錄，並獲得半決賽第一，南非老將舒曼只游出了23秒18，僅僅獲得第9，無緣八強決賽。曾經帶著癌癥之身出戰北京奧運會的美國選手尚蒂以58秒96獲得男子100米蛙泳半決賽第一，並打破了賽會紀錄。